检测产品项目
适用于兽用生物制品中外源支原体的检验。
标准
规定了用聚合酶链式反应（PCR）法、培养法检验兽用生物制品外源支原体的原理、方法和综合判定。
方法
PCR 法：
DNA 提取：采用适宜的方法提取待检样品中的 DNA，提取的 DNA 应保证质量和浓度符合后续 PCR 扩增的要求。
引物选择：根据支原体的保守序列设计特异性引物，引物应具有良好的特异性和灵敏度，能够准确扩增出目标支原体的 DNA 片段。
PCR 扩增：在反应体系中加入提取的 DNA、引物、Taq 酶、dNTPs 等反应成分，按照设定的 PCR 反应程序进行扩增，包括变性、退火、延伸等步骤。
结果判定：通过琼脂糖凝胶电泳或荧光定量 PCR 等方法对扩增产物进行检测。如果电泳结果显示出现与预期大小相符的特异性条带，或荧光定量 PCR 结果中 Ct 值在有效范围内，则判定为阳性，即样品中存在外源支原体；反之则为阴性。
培养法：
培养基选择：根据待检样品的类型和可能污染的支原体种类，选择适宜的液体培养基和固体培养基，如支原体肉汤培养基、支原体琼脂培养基等。
样品接种：将待检样品接种到液体培养基中，一般每管接种适量体积的样品，同时设置阴性对照和阳性对照。
培养观察：将接种后的液体培养基在适宜的温度和环境条件下进行培养，一般需培养 28 天左右，期间定期观察培养基的颜色变化、浑浊度等情况。若液体培养基出现浑浊或颜色变化，提示可能有支原体生长，需及时转种至固体培养基上继续培养。
固体培养与结果判定：将疑似有支原体生长的液体培养物转种至固体培养基上，在适宜条件下培养 3 天～5 天，观察固体平板上是否有典型的支原体菌落生长。支原体菌落一般呈油煎蛋样、中心致密、周边透明，若出现此类菌落，结合液体培养基的生长情况，可判定样品中存在外源支原体；若固体平板上无菌落生长，且液体培养基在整个培养期间无异常变化，则判定为阴性。
