分子诊断设备在病原体检测（如新冠病毒、HPV）、肿瘤基因检测（EGFR 突变、KRAS 突变）及遗传病筛查（地中海贫血、耳聋基因）中发挥关键作用。其检测质量需遵循 ISO 15189《医学实验室质量和能力要求》及 YY/T 1183《实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）仪》标准，确保核酸检测的高灵敏度与特异性。
核心检测性能指标
PCR 仪温控精度验证
温度均匀性：95℃时各孔温差≤0.5℃，60℃时温差≤0.3℃，确保扩增效率一致（偏差≤5%）。升温速率需≥3℃/s，降温速率≥2℃/s，缩短检测时间（如新冠检测可在 45 分钟内完成）。
荧光定量准确性
采用 10 倍梯度稀释的标准质粒（如 10⁶-10¹ 拷贝 /μL）绘制标准曲线，要求扩增效率在 90%-110% 之间，相关系数 R²≥0.99。检测限验证需确保 10 拷贝 / 反应的检出率≥95%（如 HPV 分型检测）。
基因测序仪质量控制
Sanger 测序要求读长≥1000bp，单碱基错误率≤0.1%；高通量测序（NGS）需验证测序深度（如靶向区域覆盖度≥95%，平均深度≥200X），变异检测灵敏度（体细胞突变≥5% VAF，胚系突变≥20% VAF）。
检测流程与技术要点
样本处理
采用磁珠法（如 Qiagen QIAamp 试剂盒）或柱提法提取核酸，检测 A260/A280 比值（1.8-2.0 为纯 DNA，1.9-2.1 为纯 RNA），浓度通过 Qubit 荧光定量仪校准，确保起始模板量准确。
扩增与检测
荧光定量 PCR 分为预变性（95℃ 3min）、循环扩增（95℃ 15s+60℃ 30s，40 个循环）、熔解曲线分析（60-95℃，升温速率 0.5℃/s）三步，通过收集 FAM、VIC 等通道荧光信号判定结果。百检实验室采用罗氏 LightCycler 480Ⅱ，支持多通道同时检测（如新冠病毒 N、E、ORF1ab 基因三靶标同步扩增）。
测序数据分析
NGS 流程包括文库构建（片段化、加接头）、桥式 PCR 扩增（Illumina 平台）、边合成边测序（SBS 技术），原始数据经 Base Calling、比对（BWA 软件）、变异检测（GATK 工具）后，生成变异报告，需通过阳性 / 阴性对照验证检测流程的可靠性。
百检检测优势
针对分子诊断设备的性能验证，百检提供包含温度校准、荧光通道校准、软件算法验证的全项目检测服务。合作实验室配备 Illumina MiSeq、华大 DNBSEQ-G400 等测序平台，可验证从低通量（单基因检测）到高通量（全外显子组测序）的不同场景，检测周期 7-10 个工作日，费用较同类机构低 25%，助力精准医疗实验室合规运营。
