检测产品项目
临床诊断：观察马、骡、驴等马科动物的体温、精神状态、呼吸、心跳、眼结膜、口腔黏膜等临床症状，如发热、呼吸困难、皮下水肿、黏膜出血等。
病毒分离和鉴定：采集病马的血液、脾脏、淋巴结等组织样本，进行病毒分离培养和鉴定，以确定是否存在非洲马瘟病毒。
抗体检测：通过间接 ELISA 抗体检测、阻断 ELISA 抗体检测等方法，检测马血清中的特异性抗体，判断动物是否感染过非洲马瘟病毒或是否具有免疫力。
标准
本标准规定了非洲马瘟的临床诊断、样品采集与处理，以及病毒分离和鉴定、RT-PCR、通用型 Real-time RT-PCR、型特异性 Real-time RT-PCR、间接 ELISA 抗体检测、阻断 ELISA 抗体检测等实验室诊断方法的技术要求。适用于马、骡、驴和其他马科动物非洲马瘟的诊断、检测、检疫、监测和流行病学调查。
方法
临床诊断方法：观察马属动物的临床症状，如体温升高可达 40℃-42℃，呈稽留热；精神沉郁，食欲减退或废绝；呼吸困难，心跳加快；眼结膜、口腔黏膜、鼻腔黏膜等部位出现充血、出血、水肿等症状；部分病马还可能出现皮下结缔组织水肿，尤其是胸前、腹下、四肢等部位；严重病例可出现内脏器官出血、坏死等。结合流行病学资料，如当地的发病情况、昆虫活动情况等，进行初步诊断。
病毒分离和鉴定方法：
采样：采集病马的血液、脾脏、淋巴结等组织。
处理：将采集的组织样本研磨制成悬液，离心后取上清液。
接种：将上清液接种到适宜的细胞培养物中，如 BHK-21 细胞、Vero 细胞等，观察细胞病变效应（CPE）。
鉴定：通过电子显微镜观察病毒粒子的形态、大小和结构，或者采用免疫荧光抗体试验、免疫酶标试验等方法对分离的病毒进行鉴定。
RT-PCR 和 Real-time RT-PCR 方法：
采样：采集病马的血液、组织等样本，提取其中的 RNA。
引物设计：根据非洲马瘟病毒的特定基因序列设计引物，如针对病毒的保守区域设计通用型引物，或针对不同血清型设计型特异性引物。
RT-PCR 反应：将提取的 RNA 作为模板，加入反转录酶、引物、dNTP、Taq 酶等反应成分，进行反转录和 PCR 扩增。反应条件一般包括反转录、预变性、变性、退火、延伸等步骤，具体参数根据引物和模板的特性进行优化。
结果分析：通过琼脂糖凝胶电泳或荧光定量 PCR 等方法对 PCR 产物进行分析。如果扩增出预期大小的特异性条带或荧光信号达到一定阈值，则判断为阳性。
间接 ELISA 抗体检测方法：
包被抗原：将非洲马瘟病毒抗原包被在酶标板上。
加样：加入待检马血清，血清中的抗体与包被抗原结合。
加酶标二抗：加入酶标记的二抗，与结合在抗原上的抗体结合。
显色：通过酶催化底物显色，用酶标仪测定吸光度值。
结果判定：根据标准曲线或临界值判断血清中是否存在抗体。
阻断 ELISA 抗体检测方法：
包被抗原：将非洲马瘟病毒抗原包被在酶标板上。
加样：加入待检马血清和已知的非洲马瘟病毒抗体，血清中的抗体与病毒抗体竞争结合包被抗原。
加酶标二抗：加入酶标记的二抗，与结合在抗原上的抗体结合。
显色：通过酶催化底物显色，用酶标仪测定吸光度值。
结果判定：根据标准曲线或临界值判断血清中是否存在抗体。
非洲马瘟诊断技术的发展趋势
牛恶性卡他热诊断技术的操作流程
羊泰勒虫病诊断技术的应用实例
